ICS 67.120 X 04 GP 中华人民共和国国家标准 GB/T 21981—2008 动物源食品中激素多残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of hormone multiresidues in foodstuffs of animal originLC-MS/MS method 2008-06-06发布 2008-07-03实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 21981—2008 前言 本标准附录A和附录B为规范性附录,附录C、附录D、附录E、附录F和附录G均为资料性附录 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出。 本标准由中华人民共和国国家认证认可监督管理委员会归口。 本标准起草单位:北京市疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心营养与食品安全所、中国检验 检疫科学研究院, 本标准主要起草人:邵兵、杨奕、张晶、吴永宁、储晓刚。 GB/T21981—2008 动物源食品中激素多残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了动物源食品中激素残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法 本标准适用于猪肉、猪肝、鸡蛋、牛奶、牛肉、鸡肉和虾等动物源食品中50种激素(见附录A)残留的 确证和定量测定 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准, GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—1992,neqISO3696:1987) 3方法提要 试样中的目标化合物经均质,酶解,用甲醇-水溶液提取,经固相萃取富集净化,液相色谱-质谱/质 谱仪测定,内标法定量。 4试剂和材料 除特殊注明外,本标准所用试剂均为色谱纯,水为GB/T6682规定的一级水。 4.1甲醇。 4.2 二氯甲烷。 4.3乙腈。 4.4甲酸。 4.5 乙酸:分析纯。 4.6乙酸钠(NaAC·4H,O):分析纯。 4.7β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液(β-glucuronidase/arylsulfatase):4.5U/mLβ-葡萄糖醛酸 酶,14U/mL芳香基硫酸酯酶。 4.8乙酸-乙酸钠缓冲溶液(pH5.2):称取43.0g乙酸钠(NaAC·4HO),加入22mL乙酸,用水溶 解并定容到1000mL,用乙酸调节pH到5.2。 4.110.1%甲酸水溶液:精确量取甲酸1mL加水稀释至1000mL。 4.12标准品:去甲雄烯二酮、群勃龙、勃地酮、氟甲罩酮、诺龙、雄烯二酮、罩酮、普拉雄酮、甲酮、异罩 酮、表雄酮、康力龙、17β-羟基雄烷-3-酮、美睾酮、达那唑、美雄诺龙、羟甲雄烯二酮、美雄醇、雌二醇、雌三 醇、雌酮、炔雌醇、已烷雌酚、已烯雌酚、已二烯雌酚、炔诺酮、21α-羟基孕酮、17α-羟基孕酮、左炔诺孕酮、 化可的松、泼尼松龙、氟米松、地塞米松、乙酸氟氢可的松、甲基泼尼松龙、倍氯米松、曲安奈德、氟轻松、 氟米龙、布地奈德、丙酸氯倍他索,纯度均大于97%。物质英文名称及CAS号见附录A。 1 GB/T21981—2008 4.13同位素内标:炔诺孕酮-d.、孕酮-d。、甲地孕酮乙酸酯-d、甲羟孕酮-d3、美仑孕酮-d3、炔诺酮-13C2、 氯睾酮乙酸酯-d3、氯睾酮-d3、16β-羟基司坦唑醇-d3、甲睾酮-d,、勃地龙-d3、氢化可的松-d3、睾酮-13C2、雌 酮-dz、雌二醇-13Cz、已烯雌酚-d.、已二烯雌酚-dz、已烷雌酚-d,物质英文名称见附录B 4.14标准储备液:分别准确称取10.0mg的标准品及内标于10mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至 刻度制成1.0mg/mL标准储备液,一18℃以下保存,标准储备液在12个月内稳定。 4.15混合内标工作液:用甲醇将各标准储备溶液配制成浓度为100ug/L的混合内标工作液。 4.16混合标准工作液:根据需要,用甲醇-水溶液(4.9)将各标准储备溶液配制为适当浓度(0.5,1,2, 5,10,20和40μg/L,其中炔诺酮、表雄酮、布地奈德、17β羟基雄烷-3-酮、氟米龙、氟甲睾酮为其他化合 物浓度的5倍),标准工作溶液中含各内标浓度为10μg/L。 (4.10)、6mL甲醇、6mL水活化 4.18氨基固相萃取柱(500mg,6mL),使用前用6mL二氯甲烷-甲醇溶液(4.10)活化 5仪器 5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪:配有电喷雾离子源。 5.2电子天平:感量为0.0001g和0.01g。 5.3 组织匀浆机。 5.4涡旋混合器。 5.5恒温振荡器。 5. 6 超声清洗仪。 5.7 离心机:10000r/min。 5.8 固相萃取装置。 5.9 氮吹仪。 5.10 pH计。 5.11移液器。 6试样制备 6.1动物肌肉、肝脏、虾 从所取全部样品中取出有代表性样品约500g,剔除筋膜,虾去除头和壳。用组织捣碎机充分捣碎 均匀,均分成两份,分别装入洁净容器中,密封,并标明标记,于一18℃以下冷冻存放 6.2牛奶 从所取全部样品中取出有代表性样品约500g,充分摇匀,均分成两份,分别装入洁净容器中,密封, 并标明标记,于0℃~4℃以下冷藏存放 6.3鸡蛋 别装人洁净容器中,密封,并标明标记,于0℃~4℃以下冷藏存放。 注:制样操作过程中应防止样品被污染或其中的残留物发生变化。 7分析步骤 7.1提取 称取5g试样(精确至0.01g)于50mL具塞塑料离心管中,准确加入内标溶液(4.15)100uL和 10mL乙酸-乙酸钠缓冲溶液(4.8),涡旋混匀,再加入β葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶溶液100μL,于 37℃士1℃振荡酶解12h。取出冷却至室温,加人25mL甲醇超声提取30min,0℃~4℃下 2 GB/T 21981—2008 10000r/min离心10min。将上清液转人洁净烧杯,加水100mL,混匀后待净化。 7.2净化 提取液(7.1)以2mL/min~3mL/min的速度上样于活化过的ENVI-Carb固相萃取柱(4.17)。将 小柱减压抽干。再将活化好的氨基柱串接在ENVI-Carb固相萃取柱下方。用6mL二氯甲烷-甲醇溶 液(4.10)洗脱并收集洗脱液,取下ENVI-Carb小柱,再用2mL二氯甲烷-甲醇溶液(4.10)洗氨基柱,洗 脱液在微弱的氮气流下吹干,用1mL甲醇-水溶液(4.9)溶解残渣,供仪器测定 8测定 8.1雄激素、孕激素、皮质醇激素测定 8.1.1液相色谱条件 a) 色谱柱:ACQUITYUPLCTMBEHCis柱,2.1mm(内径)X100mm,1.7μm,或相当者。 流动相:A,0.1%甲酸水溶液(4.11);B,甲醇。梯度淋洗,参考梯度条件参见表C.1。 c) 流速:0.3mL/min。 d) 柱温:40℃。 e) 进样量:10μL。 8. 1. 2 雄激素、孕激素测定参考质谱条件 a) 电离源:电喷雾正离子模式。 b) 毛细管电压:3.5kV。 c) 源温度:100℃。 d) 脱溶剂气温度:450℃。 e) 脱溶剂气流量:700L/h f) 碰撞室压力:0.31Pa(3.1X10-3mbar)。 g) 雄激素、孕激素的特征离子参见表D.1和表D.2。 8. 1. 3 皮质醇激素测定参考质谱条件 a) 电离源:电喷雾负离子模式。 b) 毛细管电压:3.0kV。 c) 源温度:100℃。 d) 脱溶剂气温度:450℃。 e) 脱溶剂气流量:700L/h。 f) 碰撞室压力:0.31Pa(3.1×10-3mbar)。 g) 皮质醇激素的特征离子参见表D.3。 8. 2 雌激素测定 8.2.1雌激素测定液相色谱条件 a) 色谱柱:ACQUITYUPLCTMBEHCi:柱,2.1mm(内径)X100mm,1.7μm,或相当者。 b) 流动相:A,水;B,乙睛。梯度洗脱,参考梯度条件参见表C.2。 c) 流速:0.3mL/min。 d) 柱温:40℃。 e) 进样量:10μL。 8.2.2 雌激素测定质谱条件 a) 电离源:电喷雾负离子模式。 b) 毛细管电压:3.0kV。 c) 源温度:100℃。 脱溶剂气温度:450℃。 3

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