ICS 11. 220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 17999.3—2008 代替GB/T17999.2—1999 SPF 鸡 微生物学监测 第3部分:SPF鸡 血清中和试验 SPF chicken—Microbiological surveillance- Part 3: Serum neutralization test for SPF chicken 2009-05-01实施 2008-12-31发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国 国家标准 SPF鸡微生物学监测 第3部分：SPF鸡血清中和试验 GB/T17999.3—2008 * 中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销 * 开本880×1230 1/16 印张 0.75 字数14千字 2009年4月第一版 2009年4月第一次印刷 * 书号：155066：1-36491 如有印装差错 由本社发行中心调换 版权专有侵权必究 举报电话：（010)68533533 GB/T 17999.3—2008 前言 GB/T 17999《SPF鸡 微生物学监测》分为10个部分： 第1部分：SPF鸡 微生物学监测总则； 第2部分：SPF鸡 红细胞凝集抑制试验； 第3部分：SPF鸡 血清中和试验； 第4部分：SPF鸡 血清平板凝集试验； 第5部分：SPF鸡 琼脂扩散试验； 第6部分：SPF鸡 酶联免疫吸附试验； 一第7部分：SPF鸡 胚敏感试验； 第8部分：SPF鸡 鸡白沙门氏菌检验； 第9部分：SPF鸡 试管凝集试验； 第10部分：SPF鸡 间接免疫荧光试验。 本部分为GB/T17999的第3部分。 本部分修订参照OIE《陆生动物（哺乳动物、禽鸟和蜜蜂）诊断试验和疫苗手册》（第五版）中的有关 规定。 本部分代替GB/T17999.2—1999《SPF鸡血清中和试验》。 本部分与GB/T17999.2—1999相比主要变化如下： 增加了规范性附录A“试剂的配制”、资料性附录B“病毒接种技术”以及资料性附录C“鸡胚接 种病毒后的病变特征”； 在试验内容部分，增加了病毒的稀释梯度； 对不同病毒致死鸡胚的时间重新确定。 本部分附录A为规范性附录，附录B、附录C为资料性附录。 本部分由中华人民共和国农业部提出。 本部分由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。 本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法 斯家禽有限公司。 本部分主要起草人：曲连东、刘家森、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、姜骞、司昌德、于海波、孟庆文。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T17999.2—1999。 SG GB/T17999.3—2008 SPF鸡微生物学监测 第3部分：SPF鸡血清中和试验 1范围 GB/T17999的本部分规定了血清中和试验的技术要求。 本部分适用于对SPF鸡进行以下病毒中和抗体的检测：禽脑脊髓炎病毒（AvianEncephalomyelitis Virus）、传染性支气管炎病毒（InfectiousBronchitisVirus）、传染性喉气管炎病毒（InfectiousLaryngo- tracheitisVirus）、传染性法氏囊病病毒（InfectiousBursalDiseaseVirus）。 2原理 中和试验系指有生物活性的病毒与相应的抗体结合后，失去原有的生物活性的中和反应。中和反 应不仅有高度特异性，且具有严格的量的关系。因此可用中和试验鉴定病毒，也可用于相应抗体的定量 检测。 3试剂和器材 3.1试剂 3.1.1病毒：禽脑脊髓炎病毒VanRoekel株（CVCCAV35）、传染性支气管炎病毒H52（CVCC AV1513）、传染性法氏囊病病毒A80株（CVCVAV2321）、传染性喉气管炎病毒A96（CVCCAV200）。 3.1.2病毒稀释液：胰蛋白陈磷酸盐肉汤（见附录A）。 3.1.3青霉素/链霉素（双抗）液（见附录A）。 3.1.43%碘酊溶液 3. 1.5SPF 胚蛋。 3.2器材 3.2.1蛋钻（打孔器）。 3.2.26号针头。 3.2.37号针头。 3.2.4混合器。 3.2.5照蛋器。 4操作程序 4.1试验准备 4.1.1血清样品处理 被检血清和阳性对照血清经56℃，30min～45min灭活补体，保存于一20℃条件下备用。 4.1.2SPF胚蛋准备 4.1.3稀释病毒 4.1.3.1取灭菌试管4支~9支，每管加入稀释液4mL、青霉素/链霉素液0.5mL 4.1.3.2第1管加人病毒液0.5mL，作连续10倍稀释。各种病毒的稀释度参见表1。 1