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ICS 65.120 B 46 GE 中华人民共和国国家标准 GB/T 23737—2009 饲料中游离刀豆氨酸的测定 离子交换色谱法 Determination of free canavanine in feeds- Ion exchange chromatography 2009-05-12发布 2009-09-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 23737—2009 前言 本标准附录A为资料性附录。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位:中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、中国农业科学院农业质量标准与检测技术 研究所[国家饲料质量监督检验中心(北京)]。 本标准主要起草人:佟建明、吴莹莹、董晓芳、张琪、苏晓鸥 GB/T23737—2009 饲料中游离刀豆氨酸的测定 离子交换色谱法 1范围 本标准规定了用离子交换色谱法测定饲料中游离刀豆氨酸的含量。 本标准适用于单一饲料及配合饲料中游离刀豆氨酸的测定。 定量限为15mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料试样的制备 3原理 试样中的游离刀豆氨酸经磺基水杨酸振荡提取,过滤并定容。该提取液经离子交换色谱柱分离并 以三酮柱后衍生后在波长为570nm下测定。 4试剂和溶液 除特殊注明外,本标准所用试剂均为分析纯,水符合GB/T6682中二级用水规定,色谱用水符合 GB/T6682中一级用水规定,溶液按照GB/T603配制 4.1盐酸溶液:移取1.7mL浓盐酸用水稀释到1L。 4.2磺基水杨酸溶液:50g/L。取5.0g磺基水杨酸用水稀释到100mL。 4.3不同pH和离子强度的洗脱用柠檬酸钠缓冲液:按仪器说明书配制。 4.4节三酮溶液:按仪器说明书配制。 4.5刀豆氨酸(CH2N.O3)标准品:纯度98%。 4.6刀豆氨酸标准溶液:称取0.001g刀豆氨酸,精确到0.0001g,用盐酸溶液(4.1)溶解定容至 10mL,此溶液浓度为100μg/mL,置4℃冰箱中保存。 4.7刀豆氨酸标准工作液:分别吸取刀豆氨酸标准溶液(4.6)0.1mL、0.2mL、0.5mL、1.0mL、 2.0mL、4.0mL于10mL容量瓶中,用盐酸溶液(4.1)定容至10mL,混匀,配制成1.0μg/mL、 2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL的刀豆氨酸标准工作液。现用现配。 5仪器和设备 5.1旋转蒸发器。 5.2实验室用样品粉碎机。 5.3样品筛:孔径0.25mm。 1 GB/T23737—2009 5.4分析天平:感量0.00001g。 5. 5 振荡器:往复250次/min。 5.6离心机:15000r/min。 5.7街 微孔滤膜:孔径0.45μm。 5.8氨基酸自动分析仪。 6采样 按照GB/T14699.1的规定执行。 7试样制备 备用。 8分析步骤 8.1试样溶液的制备 称取1g~2g试样(精确至0.1mg)置于50mL离心管中,加人20mL磺基水杨酸溶液(4.2),振 荡器(5.5)振荡提取30min,15000r/min离心10min,过滤到50mL容量瓶中。再对过滤后的试样用 20mL磺基水杨酸溶液(4.2)重复提取一次,合并两次滤液。最后用磺基水杨酸溶液(4.2)定容至 50mL。取1.0mL定容后的滤液,置旋转蒸发器(5.1)中、50C水浴下减压蒸发至干,加入1.0mL盐 酸溶液(4.1)后用0.45um滤膜过滤,上机测定。 8.2定量测定 用刀豆氨酸标准工作液(4.7),按仪器说明书,调整仪器操作参数和(或)洗脱用柠檬酸钠缓冲液的 pH,注入试样溶液(8.1)和相应浓度的刀豆氨酸标准工作液(4.7),得到色谱峰面积值,用外标法定量测 定,参见附录A。 9结果计算 试样中刀豆氨酸的含量X以毫克每千克(mg/kg)表示,按式(1)计算: X=CXA,XV :(1) A.Xm 式中: c——标准工作液(4.7)中刀豆氨酸的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); A,一试样溶液(8.1)中刀豆氨酸的峰面积值; V一一试样的定容体积,单位为毫升(mL); A。标准工作液(4.7)中刀豆氨酸的峰面积值; m试样的质量,单位为克(g)。 平行测定结果用算术平均值表示,保留三位有效数字。 10重复性 同一分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果的相对偏差不大于10%。 2 GB/T 23737—2009 附 (资料性附录) 刀豆氨酸标准色谱图 mV 50 26. 633 40 30 20 10 0 0. 0 2.5 15. 0 17.520. 0 22. 5 25. 0 27.5 30. 0 min 5.0 7. 5 10.0 12.5 图A.1 刀豆氨酸标准色谱图(20μg/mL)
GB-T 23737-2009 饲料中游离刀豆氨酸的测定 离子交换色谱法
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