ICS 65. 120 B 46 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 23187—2008 饲料中叶黄素的测定 高效液相色谱法 Determination of lutein in feeds- High performance liquid chromatography 2009-05-01实施 2008-12-31发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T23187—2008 前言 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 海区维德生物技术有限公司。 本标准主要起草人:齐德生、于炎湖、陈红、陶正国、高俊勤、邝金媚、辜垂鹏、黄楷彬、孙玉国、 张妮娅。 GB/T23187—2008 饲料中叶黄素的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了高效液相色谱法测定饲料中叶黄素的方法。 5本标准适用于单一饲料、添加剂预混合饲料、浓缩饲料及配合饲料中叶黄素的测定。方法的定量限 为 0. 5 mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法(GB/T6682—2008,ISO3696:1987,MOD) GB/T14699.1饲料采样(GB/T14699.1—2005,ISO6497:2002,IDT) GB/T20195动物饲料试样的制备(GB/T20195—2006,ISO6498:1998,IDT) 3原理 试样中叶黄素经碱液皂化及有机溶剂提取后,取上清液过滤,注人高效液相色谱仪进行分离,用紫 外检测器检测,外标法计算叶黄素的含量。 4试剂和材料 除特殊说明外,所用试剂均为分析纯试剂,用水符合GB/T6682中一级水的规定 4.1正已烷。 4.2丙酮。 4.3 无水乙醇。 4.4甲苯。 4.5甲醇。 4.6异丙醇。 4.7 氢氧化钾。 4.8 无水硫酸钠 4.9提取剂:正已烷-丙酮-无水乙醇-甲苯(34+23+20+23)混合液。 4.10 4.11硫酸钠溶液(100g/L):10g无水硫酸钠溶于100mL水中。 4.12叶黄素标准储备液:准确称取叶黄素标准品(含量大于99.0%)2mg(精确至0.1mg),先加入少 量流动相超声溶解,用流动相定容至100mL棕色容量瓶,作标准储备液,4℃避光保存,保存期3天 3叶黄素标准工作液:取叶黄素标准储备液(4.12)用流动相逐级稀释成0.5μg/mL、1.0μg/mL、 4.13 2.0μg/mL、5.0μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL系列标准工作液。 5仪器 5.1恒温水浴锅。 5.2分析天平:感量0.0001g。 5.3高效液相色谱仪:配UV-VIS检测器 1 GB/T23187—2008 5.4旋转蒸发仪。 5.5分液漏斗:250mL。 5.6分析实验室常用玻璃仪器。 6试样的制备 按GB/T14699.1采集有代表性的样品,按GB/T20195进行样品制备。粉碎过0.45mm孔筛,混 合均匀,装人密闭容器中,低温保存备用, 7分析步骤 7.1试样溶液的制备 警告—整个制备过程应避光操作! 称取试料1g~5g(m),精确到0.0001g,置于100mL棕色容量瓶中。加入30mL提取剂(4.9) 塞紧,旋转振摇1min。加人2mL40%氢氧化钾甲醇液(4.10)于容量瓶中,旋转振摇1min,将容量瓶 接上空气冷凝装置或塞紧瓶塞,置于50℃~60℃水浴中加热20min。于暗处放置1h,加入20mL正 已烷(4.1),旋转振摇1min,加人10%硫酸钠溶液(4.11)50mL,转移到250mL分液漏斗(5.5)中,猛 烈振摇1min,于暗处放置1h,取出上层溶液;水相分别加入20mL正已烷(4.1)提取两次,合并上层 液,于旋转蒸发仪中50℃~60℃水浴浓缩至干,根据样品中叶黄素含量高低,残余物加正已烷(4.1) 10mL~100mL(V),充分溶解后经0.45um滤膜过滤,滤液备用。取20uL滤液在高效液相色谱仪 上测定叶黄素组分的峰面积,根据标准工作曲线(7.2.2)计算滤液中叶黄素的浓度(co)。 7.2测定 7.2.1色谱条件 色谱柱:硅胶柱(5.0μm,250mmX4.6mm)。 流动相:正已烷-乙酸乙酯-异丙醇(73十27+1.5)混合液。 流速:1.5 mL/min。 柱温:室温。 进样量:20μl。 检测器:紫外检测器,使用波长446nm。 7.2.2标准工作曲线的绘制 各取20μL叶黄素标准工作液上机进行高效液相色谱分析。以浓度(c)为横坐标,以峰面积(A)为 纵坐标,做标准工作曲线。 8结果计算 饲料中叶黄素含量X,以质量分数[毫克每千克(mg/kg)]表示,按式(1)计算。 X= CX V :(1) m 式中: co一一由标准工作曲线查得的试样滤液中叶黄素的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V一加人正已烷的体积(7.1),单位为毫升(mL); m一一称样量,单位为克(g)。 测定结果用平行测定后的算术平均值表示,结果表示到0.1mg/kg。 9精密度 对同一样品同时或快速连续地进行两次测定,所得结果的相对偏差:叶黄素含量小于或等于 50mg/kg时,不得大于15%;含量大于50mg/kg时,不得大于10%。 2 GB/T23187—2008 5.4旋转蒸发仪。 5.5分液漏斗:250mL。 5.6分析实验室常用玻璃仪器。 6试样的制备 按GB/T14699.1采集有代表性的样品,按GB/T20195进行样品制备。粉碎过0.45mm孔筛,混 合均匀,装人密闭容器中,低温保存备用, 7分析步骤 7.1试样溶液的制备 警告—整个制备过程应避光操作! 称取试料1g~5g(m),精确到0.0001g,置于100mL棕色容量瓶中。加入30mL提取剂(4.9) 塞紧,旋转振摇1min。加人2mL40%氢氧化钾甲醇液(4.10)于容量瓶中,旋转振摇1min,将容量瓶 接上空气冷凝装置或塞紧瓶塞,置于50℃~60℃水浴中加热20min。于暗处放置1h,加入20mL正 已烷(4.1),旋转振摇1min,加人10%硫酸钠溶液(4.11)50mL,转移到250mL分液漏斗(5.5)中,猛 烈振摇1min,于暗处放置1h,取出上层溶液;水相分别加入20mL正已烷(4.1)提取两次,合并上层 液,于旋转蒸发仪中50℃~60℃水浴浓缩至干,根据样品中叶黄素含量高低,残余物加正已烷(4.1) 10mL~100mL(V),充分溶解后经0.45um滤膜过滤,滤液备用。取20uL滤液在高效液相色谱仪 上测定叶黄素组分的峰面积,根据标准工作曲线(7.2.2)计算滤液中叶黄素的浓度(co)。 7.2测定 7.2.1色谱条件 色谱柱:硅胶柱(5.0μm,250mmX4.6mm)。 流动相:正已烷-乙酸乙酯-异丙醇(73十27+1.5)混合液。 流速:1.5 mL/min。 柱温:室温。 进样量:20μl。 检测器:紫外检测器,使用波长446nm。 7.2.2标准工作曲线的绘制 各取20μL叶黄素标准工作液上机进行高效液相色谱分析。以浓度(c)为横坐标,以峰面积(A)为 纵坐标,做标准工作曲线。 8结果计算 饲料中叶黄素含量X,以质量分数[毫克每千克(mg/kg)]表示,按式(1)计算。 X= CX V :(1) m 式中: co一一由标准工作曲线查得的试样滤液中叶黄素的浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V一加人正已烷的体积(7.1),单位为毫升(mL); m一一称样量,单位为克(g)。 测定结果用平行测定后的算术平均值表示,结果表示到0.1mg/kg。 9精密度 对同一样品同时或快速连续地进行两次测定,所得结果的相对偏差:叶黄素含量小于或等于 50mg/kg时,不得大于15%;含量大于50mg/kg时,不得大于10%。 2

pdf文档 GB-T 23187-2008 饲料中叶黄素的测定 高效液相色谱法

安全标准 > 国标 > 文档预览
中文文档 4 页 50 下载 1000 浏览 0 评论 0 收藏 3.0分
温馨提示:本文档共4页,可预览 3 页,如浏览全部内容或当前文档出现乱码,可开通会员下载原始文档
GB-T 23187-2008 饲料中叶黄素的测定  高效液相色谱法 第 1 页 GB-T 23187-2008 饲料中叶黄素的测定  高效液相色谱法 第 2 页 GB-T 23187-2008 饲料中叶黄素的测定  高效液相色谱法 第 3 页
下载文档到电脑,方便使用
本文档由 思安2023-02-11 17:31:29上传分享
给文档打分
您好可以输入 255 个字符
网站域名是多少( 答案:github5.com )
评论列表
  • 暂时还没有评论,期待您的金玉良言
站内资源均来自网友分享或网络收集整理,若无意中侵犯到您的权利,敬请联系我们微信(点击查看客服),我们将及时删除相关资源。